新選組隊服方面，就是標誌性的淺蔥色 (Asagi-iro) 羽織 (haori)，及直紋的單衣。據《八木為三郎老人壬生史話》記載，隊士初到壬生之時，每人都衣衫襤褸，明顯的一貧如洗。
芹澤鴨參照了一七零一年元祿赤穗義士仇討事件的赤穗浪士，當時赤穗藩藩主遭吉良義央誣害，赤穗藩家老大石內藏助集結了四十六名浪人殺入吉良府邸，斬殺殺主仇人。當時他們正是身穿袖口繡上山形紋的黑色羽織，這便是其後新選組隊服的雛形。
元祿赤穗義士
雖然這起仇討事件最終以四十七人被下達切腹而落幕，但大石內藏助完全體現了對藩主的忠誠及堅強的信念，讓後世讚頌，也帶出了武士為了維護名聲，不顧自身性命而尋求被捨棄的公義。此故事於二零一三年被荷里活電影改編成《浪魂47》。據說芹澤鴨對引用了赤穗藩士的服飾時顯得洋洋得意。大河劇《新選組！》把近藤勇改編成參考赤穗服飾的人，而芹澤鴨情人阿梅則建議淺蔥色，芹澤鴨認同。
古時畫家對新選組身穿隊服時的描繪
至於淺蔥色是日本傳統色系裡的一種藍綠色，其名出自淺色的蔥葉。切腹是武士最崇高的死法，而淺蔥色正曾是傳統上武士切腹時所穿的禮服顏色。有說新選組採用淺蔥色是為了提醒隊士們誓死方休，為最尊嚴的一刻戰鬥至死。
倫世豪
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倫世豪@新選組
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血紅的「誠」字旗、淺蔥色的羽織，這便是新選組的標誌。轉名為新選組前的壬生浪士組，那時候已制定了「誠」字旗的構思。由紅色羅紗製成，隊旗長四尺寬三尺，正中印上「誠」字 (makoto)，下面則呈山形紋。顧名思義，這代表他們對幕府將軍家及會津藩的尊敬及忠誠。
新選組隊旗為電視劇拍攝道具
其二，當高舉「誠」字旗隨風飄逸時，著眼看和「試」字相約。「試」代表了試衛館，也就是近藤勇局長於江戶的劍道場。他於一八六零年繼承試衛館天然理心流的第四代頭目，當時二十七歲的他便成為這個劍派的掌門人，劍術也公認超凡。副長土方歲三及第一隊隊長沖田總司也分別於一八五九年及一八五二年拜入試衛館學藝；而同門山南敬助及食客藤堂平助等赴京前也曾在試衛館逗留了一段時間，所以新選組的核心人物其實對試衛館都有一定的情意結。
土方歲三袖章 (土方歲三資料館藏)
而大河劇《新選組！》也對「誠」字作出第三個解釋，就是像近藤勇般抱有誠意地對人對事。這是個很好的演繹，因為新選組有著眾多高手但背景不一，而他們也習慣浪人生活，要令團隊有一定的凝聚力確實不易。但近藤勇卻做到了，相信和他的待人接物不無關係。永倉新八在回憶錄也曾說道，起初他是以劍術修行的心態去試衛館，但逐漸被近藤勇的態度及俠義精神所吸引而留下，更隨著他闖一番理想。
大河劇《新選組！》劇照
而顏色方面，血紅色象征犧牲﹔「誠」字可作白色或金色，白色象征對忠誠心無雜念，而金色則象征忠誠可貴。隊旗內含這些意思，想必能讓隊士們士氣高昂，視死如歸。
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